N C

N- und C-Terminal-Sequenzierung

MALDI Top-Down-Charakterisierung

Identifizieren Sie Ihr Protein durch intakte Massenmessung und bestätigen Sie N- und C-Terminus-Modifikationen einschließlich Trunkierungen und Mutationen ohne proteolytische Verdauung in weniger als 1 Minute mit MALDI intakter Proteinsequenzierung.

Die intakte Massenmessung Ihrer Therapie (einschließlich Antikörper) ist mit Bruker MALDI-TOF-Instrumenten möglich, da der proprietäre Flash-Detektor einen hohen Massenbereich ermöglicht.
Top-Down-Sequenzierung (TDS) erweitert die analytischen Möglichkeiten von Bruker Massenspektrometern erheblich. TDS ermöglicht den direkten Zugriff auf Sequenzinformationen auch von großen, unverdauten Proteinen. Es erkennt und lokalisiert chemische Modifikationen, PTMs, Mutationen und Proteinisoformen, die mit klassischen Trypsinverdauungen schwieriger zu erkennen sind. TDS bietet auch die Möglichkeit, Protein-Termini gezielt zu charakterisieren und erweitert die Fähigkeiten signifikant, die zuvor von der Edman-Sequenzierung erwartet wurden.
Allen TDS-Methoden gemeinsam ist der Einsatz von Fragmentierungstechniken, die eine Peptidbindungsspaltung direkt am Ort der Anregung in der Peptidsequenz erzeugen. Dies ermöglicht regelmäßige Sequenzleiter, die relativ einfach zu interpretieren sind.

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Sequenzierung von Protein-N- und C-Termini

MALDI-TDS liest effizient N- und C-Terminus-Sequenzen auch von großen Proteinen (über 40 kDa) unter Verwendung der In-Source Decay Fragmentation (ISD) in der MALDI-Quelle aus. MALDI ISD produziert einzeln geladene Spezies, was das Auslesen der Sequenz extrem einfach macht. Diese können verwendet werden, um ein unbekanntes Protein zu identifizieren, um detaillierte Strukturen von Fusionsproteinen oder Mutationsstellen zuzuordnen. Selbst komplexe, PEGylierte therapeutische Proteine und Antikörper (intakt und Untereinheit) können mit MALDI-TDS analysiert werden. MALDI-TDS wertschöpfend und komplementär zu traditionellen Edman-Sequenzierungsfunktionen, funktioniert auch mit N-terminal-blockierten Proteinen und liefert auch Informationen über den C-Terminus. Darüber hinaus dauert die gesamte Methode nur wenige Minuten, von der Probenvorbereitung, der Spektralerfassung, der Spektralverarbeitung mit einer speziellen schnellen und zuverlässigen TDS-Software bis hin zum Ergebnis in Form eines annotierten ISD-Spektrums. Ein PDF-Bericht kann automatisch erstellt werden, um ein dokumentiertes Ergebnis der Analyse zu liefern.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Vorteile von MALDI TDS Folgendes umfassen:

  • Generierung von Sequenzinformationen, auch aus großen unverdauten Proteinen
  • Schnelle N- und C-Terminus-Charakterisierung
  • Bietet Mehrwert gegenüber Edman-Sequenzierung

 

 

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„Top-Down-Protein-Sequenzierung in einer Minute“