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Las técnicas analíticas de separación que combinan la espectrometría de masas y la cromatografía son herramientas de laboratorio consolidadas. La combinación de la cromatografía y la NMR también se ha introducido con solidez en el ámbito de los laboratorios analíticos. Los desarrollos más innovadores llegan a combinar todas tres técnicas en un sistema LC-NMR/NMR-MS y la introducción de la extracción de fase sólida como interfaz eficaz entre la cromatografía y la NMR. Existen dos tipos distintos de flujos de trabajo posibles.
 

LC Schematics

El sistema de cromatografía se puede combinar de forma más o menos directa con el espectrómetro de NMR. La muestra se transfiere al NMR “tal cual”, es decir, llega con la concentración y el disolvente tal y como lo ha suministrado el sistema de cromatografía. La muestra se puede transferir durante la separación cromatográfica y, a continuación, se adquiere el espectro de NMR en el modo de flujo (continuamente, mientras se ejecuta la cromatografía) o en el modo de detención de flujo (mientras un pico seleccionado se encuentra en la sonda de NMR y la cromatografía está detenida).

 

En un procedimiento más sofisticado, las muestras seleccionadas se encuentran de forma intermedia en los bucles de muestra y se transfieren al NMR tras finalizar la separación cromatográfica. En este procedimiento, se minimiza la manipulación de la muestra. Eso significa que después de inyectar la mezcla, los compuestos separados se transfieren al NMR sin acceso de aire ni luz y sin manipulación manual de la muestra. Además, el retraso entre la separación y el inicio de la medición NMR se puede reducir hasta 10 segundos.

 

Los sistemas LC-NMR de Bruker resultan ideales para compuestos sensibles e inestables, análisis completamente automatizados o, simplemente, para proporcionar una forma rápida y cómoda desde la separación de LC hasta los resultados de NMR.

En el último desarrollo de LC-NMR, los cartuchos de extracción de fase sólida se utilizan para inmovilizar los picos seleccionados tras la separación cromatográfica. Se eliminan los disolventes de cromatografía y las muestras se eluyen con los disolventes completamente deuterados de los cartuchos en la sonda de flujo NMR o en el tubo de muestra NMR estándar.

 

El proceso de captura/elución estándar en un cartucho SPE ya proporciona una concentración de la muestra que conlleva una mejora completa de la sensibilidad en comparación con la LC-NMR. Además, es posible repetir la cromatografía para multiplicar el contenido de la muestra del cartucho antes de la elución en la NMR. Eso fácilmente proporciona material suficiente para los experimentos inversos más exigentes o la detección de compuestos con una concentración muy baja.

 

El sistema LC-SPE-NMR de Bruker proporciona un incremento drástico de la relación señal-ruido del espectro de NMR por concentración de muestra. Eso garantiza que resulte ideal para elucidaciones estructurales completas para los experimentos inversos más exigentes o la investigación de bajas concentraciones de impurezas. Además, los disolventes de elución completamente deuterados proporcionan las condiciones estándares para la adquisición de espectro de NMR.

 

Conexión con las sondas de NMR: sondas de flujo y CryoFit

Para las mediciones de NMR de sistemas LC-(SPE)-NMR/MS mediante una conexión directa, se precisa una sonda de flujo. Bruker BioSpin ha desarrollado una amplia variedad de sondas NMR de flujo de alta resolución con una sensibilidad y configuraciones NMR exclusivas como las sondas NMR normales de 5 mm (por ejemplo, gradientes Z y XYZ de geometría inversa y TXI, ATMA, etc.). Se trata de una célula de flujo disponible en distintos tamaños.

CryoProbes™ proporciona un incremento drástico de la sensibilidad en un factor de 3-4 en el modo de funcionamiento con tubo. Bruker ofrece CryoFit™, que convierte cualquier CryoProbe estándar de 5 mm en una sonda de flujo. La concentración se realiza en cuestión de pocos minutos y mientras CryoProbes está en el imán y refrigerada. No se precisa tiempo de inactividad para el calentamiento o la refrigeración.