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Sistema de extracción en fase sólida (SPE)

El último desarrollo en el campo de las técnicas de separación

El último desarrollo en el campo de las técnicas de separación es el uso del sistema de extracción en fase sólida (SPE) como interfaz entre la cromatografía de líquidos (LC) y la NMR.
 

El uso de la conexión y la transferencia en bucle (BPSU-12, BPSU-36) es una técnica de análisis consolidada en LC-NMR. Sin embargo, las muestras se miden en el eluente y la concentración originales, tal y como proporciona el sistema cromatográfico. Se programan interferencias con eluentes (protonados) y concentraciones bajas como consecuencia de la carga limitada en la columna.

Para el proceso de LC-SPE NMR, se realiza una separación cromatográfica y los picos de interés se capturan en un cartucho SPE individual después de la columna.
 

La selección de pico se realiza mediante detección UV o la evaluación del espectro MS o MSn registrado en línea. Se preparan los picos capturados para la medición NMR (lavados, secados,...), el espectrómetro NMR se equipa con una sonda de flujo especial y se conecta al sistema SPE a través de capilares. Los picos se transfieren con un disolvente (deuterado) apropiado directamente a la sonda de flujo NMR a través de los capilares.

Características

  • La separación cromatográfica se puede realizar con disolventes económicos no deuterados o, incluso, con aditivos que no son compatibles con la espectroscopia NMR.
  • Puesto que en el eluente no se utiliza D2O, no se produce ningún intercambio H-D durante el proceso cromatográfico que genera la información de masa correcta.
  • Para la transferencia, solo se precisan pequeñas cantidades (aprox. 300 µl) de disolventes deuterados.
  • La muestra completa se eluye en un volumen pequeño (< 30 µl) de líquido procedente del cartucho de SPE. Como consecuencia de este efecto de concentración, se observa un incremento sustancial de la sensibilidad en un factor de 2 a 4, especialmente para picos más amplios.
  • Mediante la recopilación múltiple de separaciones cromatográficas subsiguientes de la misma muestra, se pueden incrementar en mayor medida la cantidad y la concentración y, en consecuencia, es posible mejorar la sensibilidad en un factor de 10 o más.
  • El disolvente deuterado que se utiliza en la elución y la transferencia es independiente de las condiciones cromatográficas y se puede seleccionar para mejorar la calidad espectral y poder observar el intercambio de protones en la NMR.
     

Para este tipo de análisis, BRUKER proporciona, ahora, un sistema SPE-NMR completo. El sistema está compuesto por:

  • Un sistema de extracción en fase sólida BRUKER/Spark Prospekt II
  • El paquete de software HyStar que controla todo el proceso en condiciones automatizadas
  • Una sonda de flujo NMR con el volumen de detección adaptado al volumen pequeño de los picos eluidos desde los cartuchos
     

Esta nueva configuración abre nuevas dimensiones para la combinación de la LC y la NMR:

  • Los experimentos heteronucleares con concentraciones de LC-NMR en el pasado solo eran posibles en un número limitado de casos, pero ahora se han convertido en experimentos estándar.
  • La disponibilidad de experimentos tipo HSQC y HMBC abren la posibilidad de utilizar LC-(SPE) NMR para la elucidación estructural de incógnitas, por ejemplo, observadas en la exploración de extractos de plantas.
     

Aunque LC-NMR se ejecutó principalmente con fuerzas de campo de 500 MHz y superiores, con SPE, la conexión de LC y NMR a campos inferiores resulta mucho más prometedora.
 

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