ROS 检测酶
瞄准纤维病的来源：酶
炎症和纤维相关疾病可能难以管理，而今天的疗法可能只有助于缓解症状，而不是解决与根本原因相关的因素。找到适当的疗法，针对与疾病的开发和进展有关的关键成分，可以是改善患者护理的有用方法。
一些最常见的炎症和纤维病包括：
- 急性呼吸系统疾病综合症
- 慢性阻塞性肺病
- 肝纤维化
- 特发性肺纤维化
- 糖尿病肾病
- 神经退行性疾病
- 阿尔茨海默病
- 帕金森病
- 缺血性中风
针对与这些疾病有关的酶被假设为降低疾病严重程度的有效方法，特别是在目前使用类固醇和/或其他各种抗炎药物的疗法中。
Nox 酶生成活性氧物种
Nox酶产生的活性氧物种（ROS）在纤维化和炎症性疾病中起着明显的作用，这是一个广为人知的事实。使用Nox抑制剂的药物治疗是有限的，而且这些抑制剂中很少有是等异形式特异性的。研究人员正在寻找小分子，在炎症和纤维病中作为异构选择性Nox抑制剂。
Nox1 到 Nox5 和 Duox1 和 Duox2 属于 Nox 酶系列，是细胞 ROS 的主要来源。线粒体电子传输酶也是细胞ROS的重要来源。ROS 的这些来源包括：
- 过氧化氢 （H2O2）
- 超氧化物基性牛 （O2⨪）
使用电子顺⨪谐振 （EPR） 检测 O2⨪ 和 H2O2
O2⨪ 和 H2O2的可靠检测方法一直困难重重，因为常用的 ROS 探头缺乏特异性和反应性，无法同时产生 O2⨪ 和 H2O2。Zielonka J等人认为，物种和地点特异性探测器在Nox同酶特异性抑制剂的研究和发现中可能允许更有效的高通量筛选。
这项研究的研究人员开发了一种快速的高通量兼容检测方法，用于使用两个探针：库马林波罗尼克酸和氢丙酸探针来测定O2⨪和H2O2的生成。在研究过程中，研究人员发现，他们能够使用基于中通量板读卡器的氧化和电子顺磁共振（EPR）自旋诱捕来识别具有可靠性和准确性的Nox酶抑制剂。
在这个实验中使用了布鲁克X波段EPR光谱仪，通过自旋诱捕帮助识别短寿命的自由基。该光谱仪能够更好地监测所研究的样品中的反应氧种（ROS）活性。布鲁克EPR光谱仪包括：
- EMXnano 是一种具有最佳灵敏度和稳定性的台式仪器，具有微波和数字技术以及集成参考标准氮气可变温度单元。
- EMXmicro，一个紧凑的光谱仪，具有多频功能和氦可变温度单元
- EMXplus 提供多频和多谐振选项/功能以及氦可变温度单元
此外，此方法，除其他外，在这项研究中使用的，有助于了解发现的Nox同酶选择性抑制剂的行动机制。研究人员的结论是，严格和迅速地识别O2⨪和H2O2将有助于更深入地理解H2O2和O2⨪生产酶背后的生物学，从而可能有助于发现选择性的Nox异构酶，并推进对炎症和纤维化相关疾病患者的护理。
引用
- Zielonka J、Cheng G、Zielonka M等人对超氧化物和过氧化氢的高通量测定：设计筛选工作流程，以识别NADPH氧化剂的抑制剂。J Biol 化学 2014;289（23）：16176~16189.
- 梁 S ，基塞列娃 T ，和布伦纳达。NADPH氧化酶（NOXs）在肝纤维化和肌纤维细胞的活化中的作用。前物理. 2016;7：17.
- 曼南 P， 斯里瓦斯塔瓦 A， 苏古纳拉杰 Jp， 李 Pj， 和索勒 M. 氧化剂在急性和慢性肺病。J 血淋巴。2014;4:1000128.
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