常见问题（FAQ）

由于BLI具有高灵敏度和低背景噪声的特点，因此最适合用于追踪细胞群、监测肿瘤生长或测定基因表达。FLI则非常适合用于生物分布研究、纳米颗粒追踪以及使用不同荧光染料进行的多重成像。

生物发光成像依赖于荧光素酶，该酶在接触底物（例如 D-荧光素）时会发光。该技术产生的背景噪声极低，非常适合对细胞或分子活动进行高灵敏度的检测。荧光成像则利用荧光探针或蛋白质，这些探针或蛋白质在外部光源的激发下会发光，具有多路复用能力，且在探针选择方面更具灵活性。

生物发光是一种酶促生物过程，其中萤光素酶在氧气存在下催化萤光素底物产生光。由于动物产生的背景光极少（仅有些许化学发光和磷光），且无需外部激发光，因此该过程可实现较高的信噪比。荧光成像需要外部光源来激发荧光靶分子/报告分子（例如蛋白质或染料）。与生物发光成像相比，活体荧光成像的信噪比较低。此外，为了更好地优化荧光成像，必须在与所用荧光染料的峰值激发波长和发射波长相对应的特定波长下进行激发和捕获光（例如，使用特定波长的LED和带通滤光片）。

BLI 通常灵敏度更高，因为它不依赖于外部激发光，因此背景噪声极低。这使得即使在深层组织中，也能在活体内部检测到极少量的存活（活）细胞。相比之下，荧光成像（FLI）由于存在激发光，背景噪声较高，但它能够进行多路检测，且适用于已死亡的样本，因此对于终点研究、组织切片以及不要求细胞存活率的检测而言，具有重要价值。

如果您的目标是监测活细胞的动态变化或纵向过程（如肿瘤生长、感染或基因表达），请选择基于荧光素酶的报告基因（BLI）。对于固定组织、体外样本，或涉及蛋白质、肽或小分子标记的研究，荧光成像（FLI）更为合适。使用 FLI 时，应选择光谱重叠最小的荧光染料；若进行体内研究，则应选用近红外（NIR）波段的荧光染料，以最大限度地减少信号衰减。

一般而言，长波长红光（尤其是波长大于 650 纳米的光）比短波长蓝光/绿光（400–500 纳米）更能穿透组织，特别是在较深层以及血红蛋白含量较高的组织中。不过，还有其他几个因素需要考虑，包括：

1. 短波长的蓝光/绿光通常比长波长的红光更亮（量子产率更高）；
2. 荧光素酶和荧光蛋白均可具有宽波长分布（可达数百纳米，从蓝光到红光）。因此，尽管以红光为主的光源在深层组织中效率最高，但在某些情况下，更亮的以蓝光为主的光源在浅层（例如皮下）组织中的穿透效果更好。

这一选择主要取决于待成像的生物过程和疾病模型。与荧光相比，生物发光具有显著更高的灵敏度，尤其是在动物体内的深层组织中。然而，大多数基于荧光素酶的报告基因需要在细胞内通过基因编码并表达，这使得标记过程比使用化学荧光染料的荧光成像更为缓慢且费时（荧光蛋白的标记工作量与荧光素酶相当）。此外，荧光报告基因可提供更广泛的波长范围，更适合同时追踪多个靶标，也更适用于转化医学模型（例如，影像引导手术）。有关光学成像探针和报告基因表达的更多信息，请参阅：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2021/06/Reporter-Expression.pdf

目前已有多种源自陆地和海洋的荧光素酶被用于小动物疾病的临床前成像。可获得性、成本、体内底物分布（药代动力学/药效学）、波长、亮度、毒性（底物）、免疫原性、氧分压依赖性、能量依赖性（如ATP）以及尺寸等因素，都是需要重点考虑的因素。

萤火虫荧光素酶：迄今为止应用最广泛的荧光素酶是北美萤火虫荧光素酶（FFluc），其针对哺乳动物优化的DNA（存在于质粒、病毒载体、工程细胞系和转基因动物中）相对容易获得，且其底物荧光素价格低廉，在体内的生物分布极佳。此外，在37°C条件下，该萤火虫荧光素酶的峰值波长为612 nm，且有相当一部分发光波长超过650 nm。目前已成功构建了亮度更高的FFluc变体（如AkaLuc），其与新型底物Akalumine结合使用时，生物发光峰值波长为650 nm。不过，该底物的价格更为昂贵。

红绿弹甲荧光素酶： 红弹甲荧光素酶和绿弹甲荧光素酶都是萤火虫荧光素酶的有力竞争者，在以萤火虫荧光素为底物的情况下，两者在活体内的表现同样出色。在浅层，这两种跳甲荧光素酶可组合使用，并因其波长不同（绿色——537 nm，红色——613 nm）而得以区分，但在深层这种区分能力便不复存在。在低pH值条件下，这两种跳甲荧光素酶的稳定性均优于萤火虫荧光素酶。

NanoLuc 萤火虫素酶：这种体积极小、亮度极高的萤火虫素酶是萤火虫萤火虫素酶的绝佳补充报告基因（适用于双重成像方法，例如用NanoLuc标记的CAR-T细胞靶向用FFluc标记的肿瘤），并具有卓越的BRET（例如，NanoLuc与长斯托克斯位移荧光蛋白融合）性能。尽管其460 nm的峰值波长对于深层成像远非理想，但其卓越的亮度（比萤火虫荧光素酶亮100至1000倍）使其成为一种可行的体内报告基因，特别是在浅层成像中。此外，由于这种荧光素酶不依赖能量（无需ATP），因此可用于标记靶向抗体，并可在细胞表面表达；这与需要ATP的萤火虫荧光素酶不同。NanoLuc的体内底物氟呋喃嗪虽然比萤火虫荧光素酶昂贵得多，但在体内的生物分布也很好。

雷尼拉荧光素酶： 传统的雷尼拉荧光素酶（生物发光峰值波长为 480 nm）亮度不及 NanoLuc，且其底物——腔肠嗪——具有一定毒性，生物分布性较差。目前已开发出雷尼拉荧光素酶的衍生物，例如 Super Rluc8（生物发光峰值波长为 540 nm），其亮度显著提高，但获取难度较大。

高斯荧光素酶： 与NanoLuc一样，这是一种体积小、发光强烈的荧光素酶，其生物发光峰值波长为460 nm。然而，该荧光素酶的底物是腔肠嗪，正如上文所述，这使其在体内成像中的应用不太理想。

细菌荧光素酶：源自发光杆菌（Photorhabdus luminescens）的细菌lux操纵子（luxCDABE）已被工程化地导入大量革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。该荧光素酶操纵子能够产生生物发光（峰值波长为480 nm），且无需外源底物。虽然已开发出可在真核/哺乳动物细胞中发挥作用的该操纵子变体，但该报告基因构建体尚未在动物成像研究中得到广泛研究或应用。

光学成像性能可能会受到动物色素沉着、毛发和皮肤厚度的影响，这些因素会影响光的散射和吸收。为了获得最佳的信号灵敏度和透射率，通常优先选择无毛、白化或白毛动物（如BALB/c或裸鼠）。如果无法使用这些品系，可以通过剃毛和/或使用脱毛膏去除体毛；此外，红移/近红外（NIR）报告基因（用于荧光成像）有助于补偿色素性动物中的信号损失。

除了光学特性外，选择与研究问题在生物学上相关的动物模型也至关重要。这意味着应选择能够准确反映您拟研究生理或病理特征的品系、遗传背景或疾病模型；无论是免疫功能、肿瘤生长行为，还是器官特异性反应。查阅现有文献以及在类似模型中进行的先前成像研究，有助于指导这一选择。

并非总是如此。毛发和色素会吸收并散射光线，尤其是荧光。裸鼠或白化鼠能提高信号检测效果，但通过优化参数设置，黑毛鼠（例如 C57BL/6）仍可成功用于成像，特别是在生物发光成像（BLI）中。关于动物毛发及其去除对成像的影响的详细信息，请继续阅读：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2022/10/rodent_depilation_v3.pdf

色素沉着和组织深度会削弱激发光和发射光，从而降低灵敏度。近红外（NIR）荧光染料的穿透深度更大，且受色素沉着的影响较小。

是的，但由于黑色素的吸收，信号可能会显得较弱。

是的，在进行定量光学成像采集时，需要使用麻醉剂使动物保持静止。异氟醚是最常用的麻醉剂，因为它起效快、安全，且适合重复成像。也可使用塞氟醚或几种注射给药方法，但在操作前最好先咨询您的兽医。

除了可能需要清除目标区域的毛发外，在进行荧光成像时，建议采用不含植物成分的饮食，以防止叶绿素产生的非特异性荧光干扰，因为这种荧光可能会干扰多种成像探头（尤其是波长在700–800 nm范围内的探头）。如需更多建议，请继续阅读：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2020/06/10Tips_Tricks_5_5_2020.pdf

推荐的对照包括：

• 未转染或未标记的细胞或动物（背景对照）
• 仅注射溶媒的对照
• 报告基因表达水平已知的参考动物
• Spectral Instruments成像校准装置（SIICD）作为阳性对照，用于在成像前确认系统运行正常

这些对照有助于结果的标准化和解读，并可确保意外信号是生物学相关的，而非由仪器变异性引起。

是的。许多研究人员会先采集荧光图像，然后进行生物发光成像。Aura 软件使您能够轻松地在同一个项目中整理和分析这两种数据类型。您可以使用 Aura 的“复合图像管理器”功能，将这两组图像合并为一张。

是的。BLI和FLI均为非侵入性技术，可对同一只动物进行数周或数月的重复成像，从而降低结果变异性并减少动物使用量。

是的，GFP可以在活体中进行成像，但需要注意一些重要事项。GFP的发射光位于绿色光谱范围内，该光谱与组织自发荧光存在重叠，且会被血红蛋白强烈吸收，从而降低了在深层组织中的灵敏度。对于浅层成像（如皮下），GFP 可能提供良好的信号；但对于深层或全身成像，通常建议使用近红外 (NIR) 荧光染料，以获得更好的信噪比和组织穿透力。

有关组织吸收和探头选择如何影响活体成像的更多详情，请参阅我们的技术说明：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2021/06/Science-of-Optical-Imaging.pdf

量子点是一种高效荧光团，被广泛应用于各种领域。然而，在临床前成像中，其一个显著缺点是吸收峰往往位于电磁光谱的紫色或紫外光谱范围内，而该波段的组织穿透深度较浅。

荧光探头或生物发光底物（荧光素）的给药途径可包括腹腔注射、皮下注射、眼眶内注射或静脉注射。给药时机取决于所使用的具体制剂：

底物（荧光素）给药： 某些实验方案建议在注射底物后几分钟进行成像（例如，皮下注射后5–10分钟或静脉注射后1–2分钟），以捕捉信号峰值。然而，在首次建立动物模型时，进行底物/荧光素动力学研究是一种良好的实践，这有助于更准确地确定底物给药后信号峰值出现的时间点。例如，在动物模型中使用 FFluc 工程细胞时，建议皮下注射 150 mg/kg 的萤火虫荧光素，并在 20 分钟内每 1–2 分钟对动物进行一次连续成像。如果信号特别微弱，可皮下注射 300 mg/kg 萤火虫荧光素。该方案同样适用于其他底物（例如，NanoLuc 用的氟呋嗪，或海肾荧光素酶、高斯荧光素酶用的腔肠荧光素）。不过，根据底物的制剂不同，给药途径可能会有所差异。

建立针对您特定模型的动力学曲线至关重要，这能确保成像在酶/底物系统的真实信号峰值处进行，并考虑组织灌注、底物输送效率和报告基因表达等生物学因素。如今，借助Aura软件中的“动力学模式”，这一过程变得非常简单：该模式可自动采集并绘制随时间变化的信号曲线，从而轻松直观地确定最佳成像窗口。

荧光素可通过皮下给药。该方案同样适用于其他底物（例如，NanoLuc 用的氟呋嗪，或海肾荧光素酶、高斯荧光素酶用的腔肠荧光素）。不过，根据底物的制剂不同，给药途径可能会有所差异。

荧光探头递送：目前市面上有大量现成的荧光探头可供选择。这些探头具有多种不同的波长和化学配方。对于体内成像而言，激发和发射波长在650 nm至850 nm之间且量子产率高的探头最为理想。在大多数情况下，这些化学荧光染料通过静脉注射给药，并在动物组织中保留24–72小时。如果采用靶向方式（例如与抗体结合）或活化方式（例如含有蛋白水解切割位点），通常在给药后6–48小时即可进行成像。

为您的特定模型建立动力学曲线至关重要，这可确保成像在酶/底物系统的真实信号峰值处进行，并考虑组织灌注、底物输送效率和报告基因表达等生物学因素。如今，借助Aura软件中的“动力学模式（Kinetics Mode）”，这一过程变得非常简单：该模式会自动采集并绘制随时间变化的信号曲线，从而轻松实现可视化并确定最佳成像窗口。

如需了解有关我们动力学功能的更多详情，请参阅此海报：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2024/03/kinetics_poster_emim_2024_print.pdf

网络研讨会：https://www.youtube.com/watch?v=0TbgVHyF8lg

光学成像具有速度快、成本低且灵敏度高的特点，因此非常适合高通量筛选和实时数据采集。与依赖放射性示踪剂的PET或SPECT等成像技术不同，光学成像利用非电离光以及生物发光或荧光报告分子，为纵向研究提供了更安全、更便捷的工作流程。

虽然PET和SPECT在定量功能成像方面具有高灵敏度和出色的穿透深度，但它们需要放射化学设施，且运营成本较高。另一方面，CT和MRI能够提供详细的解剖学信息，并具备卓越的空间分辨率和三维重建能力，但它们的扫描速度较慢、成本更高，且不太适合动态分子成像。

光学成像通过提供快速的功能和分子读数，对这些技术起到了互补作用，这些读数可用于指导或验证其他成像模态得出的结果。因此，将光学成像与CT、MRI、PET或SPECT相结合的多模态成像已日益普及，使研究人员能够更全面地了解同一动物体内的分子和解剖学变化。

如需更全面地了解临床前成像模态的比较，请继续阅读本技术说明：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2021/07/Comparison-of-Preclinical-Imaging-Modalities.pdf

体外成像具有高度的可控性和灵敏度，但缺乏活体系统的复杂性。活体成像能够捕捉整个动物的生理状况，但必须考虑组织吸收、散射和生物分布等因素。

首先验证您的报告系统在体外是否正常工作，然后进行小规模的活体初步研究。这可确保底物活性正常、荧光团稳定以及成像灵敏度达标。请阅读此技术说明以了解更多相关内容：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2024/09/why_move_from_in_vitro_to_in_vivo2.pdf

对经荧光素酶基因工程改造的细胞或（转基因）动物进行成像时，信号强度较低的潜在原因可能包括：

1. 报告基因递送效率低下或无效（转染、病毒转化）；
2. 启动子或响应元件活性较弱；
3. DNA甲基化（尤其是病毒启动子）；
4. 底物剂量不足；
5. 底物递送方式错误（静脉注射时未命中尾静脉，或腹腔注射时误注入脂肪垫）；
6. 底物的药代动力学/药效学（PK/PD）递送不足（穿过血脑屏障的能力降低，或难以穿过动物体内的物理结构/组织基质）。

高背景荧光可能由多种原因引起，包括：

1. 动物自身的自发荧光（例如，饮食中含有植物成分）；
2. 成像腔室中的磷光材料（例如，塑料或染料标记物）；
3. 设备污渍。

成像试剂的给药不均匀可能会导致结果出现波动。为了获得最一致的结果，请规范操作流程，并确保底物分布均匀。对于生物发光研究，请使用Aura软件的“动力学”功能，在报告酶达到峰值平台期时识别并捕获图像。

D-荧光素是萤火虫荧光素酶的标准底物，而腔肠素则用于海肾荧光素酶。底物通常通过腹腔注射（ip.）、皮下注射（subQ）或静脉注射（iv）给药。如需了解有关优化底物剂量的更多详情，请阅读此技术说明：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2025/01/Optimizing_Substrate_Dosing_for_Reliable.pdf

进行动力学实验吧！Aura 的“动力学”功能可自动检测峰值/平台期，帮助您确定最佳成像时机，从而获得一致的结果。如需了解更多详情，请观看这段关于 Aura 中“动力学”功能的网络研讨会：youtube.com/watch?v=0TbgVHyF8lg

使用近红外探头，并在成像前至少5天让动物改用不含苜蓿的饲料。如需更多建议，请继续阅读：https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2020/06/10Tips_Tricks_5_5_2020.pdf

在每次实验中，应保持底物剂量、给药途径和给药时间的一致性。在预实验阶段，利用Aura的“动力学”功能确定信号的平台期，然后将该成像窗口固定用于所有时间点。保持麻醉方案和成像温度的一致性，也有助于减少生理变异性。

Spectral Instruments 的成像系统均专为生物发光和荧光成像而设计；部分机型还支持平面 X 射线成像。作为布鲁克旗下品牌，Spectral 的部分数据可与其他布鲁克及 Molecubes 的临床前成像模态（如 mCT、PET、SPECT 和 MRI）进行配准。

这取决于您的系统型号。Lago/X 最多可同时容纳 10 只小鼠。Ami HT/X 最多可同时容纳 5 只小鼠。Kino 最多可同时容纳 3 只小鼠。此外，大鼠、仓鼠、豚鼠、非人灵长类动物、斑马鱼以及许多其他动物模型也可进行成像。

由于系统已在出厂时完成校准，因此无需进行校准。请改用 Spectral Instruments 成像校准装置（SIICD）进行参考检查。

为了在同时对多只动物进行成像时获得一致且可靠的成像结果：应统一进行麻醉和体位摆放：

1. 确保所有动物处于相似的麻醉水平，并在成像平台上保持一致的体位。这可减少因运动或体位变化导致的信号波动。
2. 注射时机与一致性：对所有动物，应同时通过相同途径注射底物（用于生物发光成像）或荧光探头。这可确保每只动物在底物摄取或报告基因表达的可比阶段接受成像。
3. 动物处理系统：对于样本量较大的研究，应考虑使用动物管理系统以优化工作流程并提高定位精度：

           • DecaFlow：可高效对多达20只小鼠进行成像，定位精准，并支持快速更换托盘以实现连续成像。https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2023/10/decaflow_flyer.pdf 

           • PentaFlow：支持多达10只小鼠，具备相同的效率和定位优势。https://spectralinvivo.com/wp-content/uploads/2023/10/pentaflow_flyer_v5.pdf

大多数实验时长为5至20分钟。在进行适当监测并启用Spectral Instruments成像系统中的“加热平台”功能以预防低体温的情况下，也可进行更长时间的实验。请参阅您项目对应的动物操作规程，并咨询您的兽医。

虽然所有 Spectral Instruments 成像系统均采用直观的 Aura 软件，但它们的设计旨在满足不同的工作流程需求和实验规模。主要区别包括视场、灵敏度、LED 激发波长、发射滤光片选项以及升级路径：

• Kino：一款可同时对三只小鼠进行成像的台式系统。该系统提供10种LED激发波长和5种发射滤光片，适用于标准生物发光成像（BLI）和基础荧光成像（FLI）应用。特别适合空间和通量受限的小规模研究。
• Ami HT：同样是一款台式系统，Ami HT最多可同时容纳五只小鼠。该系统配备10种LED激发波长和10个发射滤光片，为多路成像以及比Kino系统要求更高灵敏度的研究提供了更强的灵活性。可选配X射线功能或进行现场升级。随着实验需求的增长，该系统还具备功能扩展的升级路径。
• Lago：一款专为高通量、高要求的临床前工作流程设计的落地式系统，最多可同时对十只小鼠进行成像。Lago 提供 14 种 LED 激发波长和 20 种发射滤光片，并具备该产品线中最高的灵敏度。可配备 X 射线功能或进行现场升级。该系统支持 3D BLI/断层成像等高级工作流程，并可与布鲁克/Molecubes 的 MRI、μCT、PET 和 SPECT 进行配准，以实现多模态成像。

如需查看所有系统的规格、功能及升级选项的完整对比，请访问：https://spectralinvivo.com/imaging-systems/

您可以从以下标准发射滤光片系列中进行选择：490、510、530、550、570、590、610、630、650、670、690、710、730、750、770、790、 810、830、850 和 870nm

所有 Spectral 活体成像系统均配备了一台深度冷却的定制相机，该相机利用风冷珀尔帖系统，可在不到 5 分钟的时间内将 CCD 传感器快速冷却至 -90°C。这种设计提高了效率，通过降低噪声提升了图像质量，并消除了气体或液体冷却系统中存在的泄漏风险，从而提高了可靠性。更多相关信息请点击此链接：https://spectralinvivo.com/data/#no-leaks

灵敏度在很大程度上取决于系统中的背景噪声水平，因为灵敏度本质上就是能够从噪声中分辨出的最小信号。

衡量成像系统灵敏度的黄金标准是最小可检测辐射度（MDR）。

正确的清洁有助于保持系统的性能和使用寿命。请遵循以下指南：

外部表面：

• 请使用无绒布蘸取肥皂水，或使用以下经批准的清洁溶液之一：

          - 70% 酒精（乙醇或甲醇）/ 30% 去离子水

          - Clidox®-S

          - Sporicidin®

          -Trifectant® 消毒剂

          -MB-10 - 70% alcohol (ethyl or methyl) / 30% deionized water

内部表面（成像腔和平台）：

• 请勿将液体直接喷洒或倒入腔室内。
• 用清洁溶液浸湿一块无绒擦拭布，然后轻轻擦拭平台或腔室壁。
• 为尽量减少某些清洁剂可能引起的荧光伪影，请随后用去离子水擦拭表面。避免水在平台上积聚。

重要提示：

• 在未事先联系 Spectral Instruments Imaging 的情况下，请勿清洁成像腔的天花板。操作时须格外小心，以免损坏敏感的光学元件。

Spectral Instruments 成像系统设计上尽可能减少用户维护需求。无需进行例行校准；系统已在出厂时完成校准。预防性维护通常由经认证的服务工程师每年进行一次。

不，没有必要每天晚上都关闭系统。大多数用户只需关闭Aura，并将系统保持在绿色模式下，此时系统会进入低功耗待机状态。这有助于保持摄像头温度的稳定性，并能让系统次日更快启动。

系统启动后，几分钟内即可准备就绪。其中耗时最长的环节是相机冷却：相机大约需要 5 分钟才能冷却至其工作温度（绝对 –90°C）。在相机冷却期间，您可以开始设置数据采集会话，因此当您准备好进行成像时，系统也已准备就绪。

通常情况下，系统可在订单处理后48小时内从库存中发货。

是的。您可以通过在此处提交请求，申请观看我们成像系统的远程演示：https://spectralinvivo.com/live-demo。通过远程演示，您可以直观了解系统的实际运行情况，了解软件工作流程，并实时向应用科学家提问。

从 IVIS™ 系统过渡到 Spectral Instruments 成像系统非常简单，且具有多项优势。所有 Spectral 系统均采用 Aura 软件，该软件为生物发光成像（BLI）和荧光成像（FLI）提供了直观的操作界面，同时保留了用户熟悉的定量工作流程。您还可以导入旧版 LivingImage™ 文件，并在 Aura 中直接进行分析。与 IVIS™ 一样，Spectral 系统均经过严格校准，符合可追溯至 NIST 的光子标准，从而能够跨仪器和平台直接比较数据集。借助 LED 激发波长扩展的荧光功能，可提升多路复用和组织成像效果。动力学模式支持对生物发光底物进行自动峰值/平台期检测，确保纵向研究的可重复性。全面的技术支持、文档、技术说明和教程将指导用户进行探针选择、动物操作以及成像最佳实践。

是的。Aura Analysis 软件可免费下载，Mac 和 PC 用户均可使用。

除了用户手册（可在主菜单的“帮助”中找到）外，我们的学习中心还提供了多段视频教程和技术说明，以帮助您入门。您也可以在此申请免费的远程培训：spectralinvivo.com/contact-us/

是的。Aura 可以直接导入 Living Image 文件。操作方法如下：点击“文件”→“图像管理器”，选择所需文件，然后点击“加载”。您的图像将显示在 Aura 中，以便进行处理和定量分析。点击此链接查看视频教程：https://www.youtube.com/watch?v=PvDJO-ps1AQ&feature=youtu.be

是的。所有 Spectral Instruments 成像系统均采用 Aura 软件，确保跨平台用户体验的一致性。在任何系统上采集的数据，均可在同一工作区内或通过我们的免许可分析软件进行分析、处理和比较。

是的。每套 Spectral Instruments 成像系统均严格依据同一项可追溯至 NIST 的光子标准进行绝对校准，因此不同仪器之间——甚至不同机构或合作者之间——的数据集均可直接进行比较。这种一致性确保了测量结果的可重复性和定量性，是开展合作研究或多中心研究的关键优势。此外，正因采用了这种绝对校准，Spectral 系统生成的数据也可与其他经过绝对校准的平台（如 IVIS™）进行比较，从而实现更广泛的跨平台分析。

从工具箱中选择“感兴趣区域（ROI）”工具，并在感兴趣区域周围绘制形状。可以调整、复制感兴趣区域，或将其应用于多张图像，以确保测量结果的一致性。对于BLI，请使用“总发射量（光子/秒）”来量化感兴趣区域内的信号。对于荧光，请使用“总效率（cm²）”。如需分步指南，请观看这段关于ROI分析的简短教程：https://www.youtube.com/watch?v=GaASXN8aRTQ

是的。Aura 支持对图像和定量数据进行并排比较。要实现这一功能，请启动 Aura，依次选择“文件”→“图像管理器”，选中多个 .amix 文件，然后点击“加载”。

在 Aura 中，您可以通过点击“文件”→“保存图形”，选择所需的文件类型（PNG、TIFF、JPEG、BMP 或 PPM），然后点击“保存”来保存图像。这样，您就可以导出适合用于演示文稿、手稿或报告的高质量图像。

在大多数情况下，您可以先从“简易模式”开始，该模式会自动为您的图像确定最佳采集设置。此模式在灵敏度和动态范围之间取得平衡，有助于您获取高质量的数据。

如果您希望在生物发光成像（BLI）中使用手动模式，可以根据需要对曝光时间、像素合并和光圈进行微调，同时注意避免饱和。若收到关于像素过曝的提示，请缩短曝光时间、降低像素合并级别或稍微缩小光圈。

若您希望在荧光成像（FLI）中使用手动模式，应首先调整激发和发射滤光片的选择以及 LED 功率百分比。结合曝光时间、像素合并和光圈对这些设置进行优化，以最大限度地提高信噪比。

不。由于 Spectral Instruments 的成像系统经过绝对校准，所有总发射量和总效率的测量结果均与相机设置无关，因此无需进行归一化处理。

绝对校准可实现基于光子的定量测量（光子/秒），且该测量结果与采集参数无关。这确保了已发表数据的可重复性，使图表和数据集在不同研究之间具有可追溯性和可比性；而这一点在依赖任意“强度单位”的系统中往往缺失。

请从10-15秒的短曝光时间开始，并根据需要进行调整。如果信号较强，请缩短曝光时间以防止过曝；如果信号较弱，请延长曝光时间并/或使用像素合并功能来提高灵敏度。您还可以使用“智能自动曝光”功能，该功能可在Aura的“简易模式”中启用。

在Aura的“过曝像素图”（位于“图像类型”下）中检查是否存在过曝像素，并减少：曝光时间、LED激发功率百分比或像素合并级别。调整激发和发射滤光片组，以提高信噪比。

请使用“辐射通量”作为计量单位，并将您的BLI数据以“总发射量”（光子/秒）为单位进行报告。即使不同采集之间的曝光时间或其他相机参数（例如像素合并、光圈值）有所不同，您仍然可以直接比较不同时间点的总发射量数值。这是因为所有Spectral Instruments成像系统均经过绝对校准。